Utilización de glioblastomas en la obtención de medios condicionados para la generación de hibridomas muridos secretores de anticuerpos monoclonales / Use of glioblastomas in the obtention of conditioned media for the generation of murine hybridomas secreting monoclonal antibodies

Se ha demostrado que las células de glioblastoma humanoproducen interleucemia 6, la cual estimula la proliferación de plasmocitomas secretores de anticuerpos monoclonales. Con el objetivo de obtener medios condicionados se establecieron cultivos primarios de glioblastoma. Estos medios se utilizaron como suplemento en las fusiones de células de mieloma de ratón P3-X63Ag8.653 y esplenocitos de ratones BALB/C hiperinmunes. Se observaron cultivos con una eficiencia de fusión mayor con estos medios condicionados como suplemento, se se compara con aquéllos realizados con capas alimentadoras de macrófagos de la cavidad peritoneal de ratón o sin suplementos. Además ,en los clonajes y reclonajes se usó un clono secretor de anticuerpo monoclonal anti-A, que resultó muy estable, lo que sugiere que es posible obtener un incremento de hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales de especificidad deseada en cultivos con factor de crecimiento de hibridoma derivado de glioblastoma

Métodos para el pesquisaje de anticuerpos contra antigenos de grupos sanguineos del sistema ABO humano / Methods for the screeninig antibodies of the human ABO blood group system

Para el pesquisaje inicial de anticuerpos contra antígenos de grupos sanguíneos (tanto en los sueros de ratón como en los sobrenadantes de hibridomas) se utilizó la técnica de aglutinación en microplacas empléandose hematíes A1,A2,Ax, B y O tratados con bromelina. Una vez identificados los clones de hibridomas productores, se estudiaron sus correspondientes líquidos ascíticos por los métodos de aglutinación en microplacas, en tubos por centrifugación y sedimentación y en láminas, lo que permitió demostrar que con el método de pesquisaje inicial se puede procesar un elevado número de muestras y utilizar pequeñas cantidades de sobredonantes, además de que permite seleccionar reactivos adecuados para el fenotipo de grupos sanguíneos en tubos, en láminas y microplacas, que son las 3 técnicas más usadas en el mundo para el inmunofenotipaje de los donantes

Obtención de anticuerpos especifícos para la IgG de ratón / Production of specific antibodies to mouse IgG

Se llevó a cabo la purificación de IgG de ratón, con la que se preparó un antisuero en cabra. A partir de este antísuero se aislaron los anticuerpos específicos por cromatrografía de afinidad, con el empleo de la IgG de ratón purificada acoplada a la Sepharosa C1-4B. Se obtuvo una concentración de los ancuerpos aislados de 1,5 mg/mL, con una cantidad que representó aproximadamente el 3 por ciento del total de anticuerpos. Se evaluó la pureza, la reactividad y la especificidad de estos anticuerpos

Efecto de diferentes sueros y factores de crecimiento en las líneas de plasmacitomas de ratón P3/X-63-Ag8.653 y P3/NS-1/1 Ag 4-1 / Effect of different sera and growth factors in P3/x-63-Ag8.653 and P3/NS'1/1 Ag 4-1 lines of mouse plasmacytomas

Se estudió el efecto de diferentes sueros y medios condicionados en el crecimiento de las líneas X-63 y NS-1. Se utilizaron sueros: fetal bovino, de caballo, de terneros recién nacidos y de condón umbilical humano, a una concentración del 10 por ciento solos o en combinación con 2 por ciento de interleucina-6 o de factor estimulador de colonias no purificados (en medios condicionados). En condiciones de altas densidades celulares se obtuvo la mayor proliferación con el suero de caballo y con el de cordón umbilical y la adición de los factores estimuló preferencialmente el crecimiento de las células NS-1. A bajas densidades celulares se obtuvieron colonias multicelulares, con inóculos iniciales de 5-10 células/pozo, en presencia del suero de caballo o de cordón umbilical y en menor medida con el suero fetal bovino. Las eficiencias de siembre en placas también fueron superiores con ambos sueros

Purificación de transferrina sérica humana y obtención de un antisuero específíco / Purification of human serum transferrin and attainment of a specific antiserum

Se realizó la purificación de la transferrina sérica humana a partir de la fracción IV de Cohn, y la misma se le administró a un chivo siguiendo un esquema de inmunización que permitió la obtenciòn de un antisuero monoespecífico, al que se le aisló la fracción IgG mediante cromatografía de intercambio iónico. El nivel de purificación de la transferrina sérica humana y su antisuero específico, obtenidos por los métodos utilizados en este trabajo, es satisfactorio, lo que permitirá su uso en el desarrollo de diferentes técnicas inmunològicas e inmunoenzimàticas para la medición de transferrina y la sustitución de los disponibles comercialmente, debido a la limitante que representa su elevado costo